Áttekintés
Az ikatibant-acetát a Shire által kifejlesztett hemangioid angioma (HAE) betegségspecifikus kezelése, amely 2011. augusztus 25-én megkapta az FDA jóváhagyását, örökletes angioödéma akut epizódjainak kezelésére 18 éves és idősebb felnőtteknél. Ez egyben a harmadik gyógyszer, amelyet az FDA hagyott jóvá a HAE-támadások kezelésére. Az ikatibant-acetát szerkezete hasonló a bradikinin-szerű d-dekapeptidhez, de öt, nem fehérje eredetű aminosavat tartalmaz. A 2-es típusú (B2) bradikinin receptorok hatékony, szelektív kompetitív antagonistájaként működik, enyhíti a HAE-epizódokkal kapcsolatos helyi duzzanatot, gyulladást és fájdalmat a bradikinin hatásának gátlásával. A HAE csak egy a számos lehetséges indikáció közül, amelyekre az ikatibant javallt; egyéb lehetséges alkalmazások közé tartozik az asztma, a májcirrózis és más típusú angioödéma. Következésképpen az ikatibant-acetát jelentős terápiás értékkel és széles körű piaci kilátásokkal rendelkezik.
Kémiai szerkezeti képleteIkatibant-acetát
ElényegesIninformáció
Kínai név:醋酸艾替班特
Angol neve: Ikatibant-acetát
Cégazonosító：GT-F005
CAS：138614-30-9；130308-48-4
Ssorozatszám：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH
Molekuláris képlet：C59H89N19O13S
Molajtömeg：1304.52
Ikatibant-acetát MS spektrum
Szintetikus útvonal
1. ábra: Fmoc-Arg(Pbf)-CTC gyanta előállítása
Adjunk a szilárd fázisú reakcióoszlophoz 11,1 g 2-klór-trifenil-metil-klorid gyantát 0,9 mmol/g szubsztitúciós sebességgel, majd adjunk hozzá DMF-fel duzzasztott gyantát 30 percig. Adjunk hozzá 3,50-etμL DIPEA-t 12,98 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH-hoz és aktiváljuk 5 percig; majd hozzáadjuk a DMF-fel duzzadt gyantát és hagyjuk, hogy a keverék 10 perc múlva egyensúlyba kerüljön. Adjunk hozzá még 3,50-etμL DIPEA-t, szobahőmérsékleten 45 percig reagáltatjuk, végül 20 percig metanollal lezárjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, háromszor DMF-fel, háromszor DCM-mel mossuk, majd metanollal háromszor összehúzzuk 3 percig, 5 percig, illetve 8 percig, így Fmoc-Arg(Pbf)-CTC gyantát kapunk 0,5 mmol/g szubsztitúciós sebességgel.
2：Csatolás -ból Fmoc-Rangidős tiszt-Ó
Mérjünk le 10 mmol Fmoc-Arg (Pbf)-CTC gyantát, és adjuk hozzá egy szilárdfázisú reaktorhoz, duzzasztjuk DMF-ben 0,5 órán át, majd távolítsuk el az Fmoc-védelmet kétszer 20%-os DBLK-oldattal 10, illetve 5 percig; mosás után konjugáljuk Fmoc-Oic-OH-val. Oldjunk fel 11,73 g Fmoc-Oic-OH-t, 4,9 g HOBt-t és 6,1 ml DIC-t DCM-ben (kis mennyiségű DMF adható hozzá a szolubilizáláshoz), aktiválja az elegyet jeges vízfürdőben 7 percig, majd helyezze át a szilárd fázisú reaktorba, és szobahőmérsékleten 1 percig reagáljon.–2 óra. A reakció végpontját az indantron módszerrel határozzuk meg. A reakció befejeződése után szívja le a reakcióelegyet, mossa le DMF-fel, távolítsa el az Fmoc-védelmet kétszer 20%-os DBLK-oldattal 10 percre, illetve 5 percre, mossuk újra, és készítsük elő a következő aminosavval történő kapcsolást.
3：Csatolás -ból Fmoc-D-Cit-Ó
Oldjunk fel 11,91 g Fmoc-D-Cit-OH-t, 5,00 g HOAt-ot és 11,4 g HATU-t DCM-ben (kis mennyiségű DMF hozzáadásával a szolubilizáláshoz). Adjunk hozzá 3,87 g DIPEA-t jeges vízfürdő alatt, és aktiváljuk 7 percig; majd az elegyet átvisszük egy szilárd fázisú reaktorba, és szobahőmérsékleten 1 percig reagáltatjuk–2 óra. A reakció befejeződését az indiol módszerrel határozzuk meg. A reakció után a reakcióelegyet eltávolítjuk, DMF-fel mossuk, és 20%-os DBLK-oldattal szüntessük meg az Fmoc-védelmet. Mosás után készüljön fel a következő aminosavval való összekapcsolásra.
4：Csatolás -ból Fmoc-Ser(tBu)-Ó
Oldjunk fel 11,49 g Fmoc-Ser(tBu)-OH-t, 5,00 g HOAt-ot és 6,1 ml DIC-t DCM-ben (kis mennyiségű DMF hozzáadásával a szolubilizáláshoz). 7 perces jeges vízfürdőben történő aktiválás után helyezzük át az elegyet egy szilárd fázisú reaktorba, és reagáltassuk szobahőmérsékleten 1 percig.–2 óra; a reakció befejeződését az indiol módszerrel határozzuk meg. A reakció befejezése után távolítsa el a reakcióelegyet, mossa meg DMF-fel, majd távolítsa el az Fmoc-védelmet 20%-os DBLK-oldattal, majd mosson, mielőtt folytatná a következő aminosavval történő kapcsolást.
5：Csatolás -ból Fmoc-Thi-Ó
Oldjunk fel 11,79 g Fmoc-Thi-OH-t, 5,00 g HOBt-t és 11,37 g HBTU-t DCM-ben (kis mennyiségű DMF hozzáadásával a szolubilizáláshoz). Adjunk hozzá 3,87 g DIPEA-t jeges vízfürdő alatt, és aktiváljuk 7 percig; majd helyezzük át az elegyet egy szilárd fázisú reaktorba, és hagyjuk szobahőmérsékleten 1 percig reagálni–2 óra. A reakció befejeződését az indiol módszerrel határozzuk meg. A reakció után a reakcióelegyet eltávolítjuk, DMF-fel mossuk, és 20%-os DBLK-oldattal szüntessük meg az Fmoc-védelmet. Mosás után készüljön fel a következő aminosavval való összekapcsolásra.
6：Csatolás -ból Fmoc-Gly-Ó
Oldjunk fel 8,91 g Fmoc-Gly-OH-t, 5,00 g HOBt-t és 9,63 g TBTU-t DCM-ben (kis mennyiségű DMF hozzáadásával a szolubilizáláshoz). Adjunk hozzá 3,63 g TMP-t jeges vízfürdő alatt, és aktiváljuk 7 percig; majd helyezzük át az elegyet egy szilárd fázisú reaktorba, és hagyjuk szobahőmérsékleten 1 percig reagálni–2 óra. A reakció befejeződését az indanon módszerrel határozzuk meg. A reakció után a reakcióelegyet eltávolítjuk, DMF-fel mossuk, és 20%-os DBLK-oldattal szüntessük meg az Fmoc-védelmet. Mosás után készüljön fel a következő aminosavval való összekapcsolásra.
7：Csatolás -ból Fmoc-Hyp(tBu)-Ó
Oldjunk fel 12,27 g Fmoc-Hyp(tBu)–Ó, 5,00 g HOAt és 9,66 g TATU DCM-ben (kis mennyiségű DMF hozzáadásával a szolubilizáláshoz). Adjunk hozzá 3,63 g TMP-t jeges vízfürdő alatt, és aktiváljuk 7 percig; majd az elegyet átvisszük egy szilárd fázisú reaktorba, és szobahőmérsékleten 1 percig reagáltatjuk–2 óra. A reakció végpontját az indiol módszerrel határozzuk meg. A reakció befejezése után távolítsa el a reakcióelegyet, mossa le DMF-fel, és szüntesse meg az Fmoc-védelmet 20%-os DBLK-oldattal. Mosás után készüljön fel a következő aminosavval való összekapcsolásra.
8：Csatolás -ból Fmoc-Pro-Ó
Oldjunk fel 10,11 g Fmoc-Pro-OH-t, 5,00 g HOAt-ot és 11,4 g HATU-t DCM-ben (kis mennyiségű DMF hozzáadásával a szolubilizáláshoz). Adjunk hozzá 3,87 g DIPEA-t jeges vízfürdő alatt, és aktiváljuk 7 percig; majd az elegyet átvisszük egy szilárd fázisú reaktorba, és szobahőmérsékleten 1 percig reagáltatjuk–2 óra. A reakció végpontját az indiol módszerrel határozzuk meg. A befejezés után távolítsa el a reakcióelegyet, mossa le DMF-fel, és szüntesse meg az Fmoc-védelmet 20%-os DBLK-val. Mosás után készüljön fel a következő aminosavval való összekapcsolásra.
9：Csatolás -ból Fmoc-Arg (Pbf)-Ó
Oldjunk fel 19,44 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH-t, 5,00 g HOAt-ot és 11,4 g HATU-t DCM-ben (kis mennyiségű DMF hozzáadásával a szolubilizáláshoz). Adjunk hozzá 3,87 g DIPEA-t jeges vízfürdő alatt, és aktiváljuk 7 percig; majd az elegyet átvisszük egy szilárd fázisú reaktorba, és szobahőmérsékleten 1 percig reagáltatjuk–2 óra. A reakció befejeződését az indiol módszerrel határozzuk meg. A reakció után a reakcióelegyet eltávolítjuk, DMF-fel mossuk, és 20%-os DBLK-oldattal szüntessük meg az Fmoc-védelmet. Mosás után készüljön fel a következő aminosavval való összekapcsolásra.
10：Csatolás -ból Fmoc-D-Arg (Pbf)-Ó
Oldjunk fel 19,44 g Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH-t, 5,00 g HOAt-ot és 11,4 g HATU-t DCM-ben (kis mennyiségű DMF hozzáadásával a szolubilizáláshoz). Adjunk hozzá 3,87 g DIPEA-t jeges vízfürdő alatt, és aktiváljuk 7 percig; majd az elegyet átvisszük egy szilárd fázisú reaktorba, és szobahőmérsékleten 1 percig reagáltatjuk–2 óra. A reakció végpontját az indiolon módszerrel határozzuk meg. A befejezés után távolítsa el a reakcióelegyet, mossa le DMF-fel, majd használjon 20%-os DBLK-t az Fmoc-védelem eltávolításához. Mossuk háromszor DMF-fel, háromszor DCM-mel és háromszor metanollal a kontrakcióhoz (3 percig, 5 percig és 8 percig), majd vákuumszárítással etibant peptid-acetát gyantát kapunk.
Ikatibant-acetát HPLC kromatogramja
11：Ikatibant-acetát gyanta pirolízise
Készítsen elő 200 ml lizáló reagenst, amely 190 ml trifluor-ecetsavat, 6 ml triizopropil-szilánt és 4 ml vizet tartalmaz, és 30 percig előhűtse a hűtőszekrényben. Adjunk hozzá 20,0 g etibant peptid-acetát gyantát egy 500 ml-es gömblombikba, majd adjuk hozzá az előkészített 200 ml-es lízisreagenst a gyantához, miközben jeges fürdőben és nitrogénáram alatt keverjük. 30 percnyi reakció után eltávolítjuk a jeges fürdőt, és a reakciót szobahőmérsékleten 2 órán át folytatjuk. Szűrjük le a gyantát, és gyűjtsük össze a szűrletet. Mossa ki a gyantát kis mennyiségű trifluor-ecetsavval, szűrje le, és egyesítse a szűrleteket. Fokozatosan adjuk hozzá a szűrletet 20 liter jéghideg éterhez; fehér csapadék képződik. Centrifugáljuk 3000 ford./perc sebességgel a csapadék összegyűjtéséhez, mossuk ötször jéghideg éterrel, és csökkentett nyomáson szárítjuk, így 10,3 g nyers peptidet kapunk, HPLC tisztaságú >90%.
