5-aminofluoreszcein

Az 5-aminofluoreszceint (más néven 5-AF-t vagy fluoreszceinamint) széles körben használják fluoreszcens jelölőreagensként. Az 5-aminofluoreszcein primer aminja reagálhat karboxilcsoportokkal (EDC/NHS aktiválással), aldehidekkel, ketonokkal vagy aktivált észterekkel (például NHS-észterekkel), stabil amid- vagy iminkötéseket hozva létre. A gerjesztési maximumot ~490 nm-nél (λmax = 496 nm borátpufferben, pH 8,5) és az emissziós maximumot ~515 nm-nél mutat, jó fotostabilitású fényes zöld jelet és körülbelül 40 nm-es Stokes-eltolást ad. Fluoreszcencia intenzitása pH-függő, lúgos körülmények között (pH 8-9) jelentősen növekszik, ami az aminocsoport protonált állapotában bekövetkezett változásoknak tulajdonítható.

Az 5-aminofluoreszceint széles körben használják a biológiai és orvosi kutatásokban – a fehérjék és antitestek jelölésétől a célzott gyógyszeradagoló rendszerek és fluoreszcens érzékelők megalkotásáig. Az 5-aminofluoreszcein kulcsfontosságú intermedier a fluoreszcein-izotiocianát (FITC Isomer I) szintézisében is, amely az egyik legnépszerűbb fehérjejelölési reagens.

Termékparaméterek

Előkészületi és tárolási megjegyzések

Az 5-AF-et jellemzően 4-nitroftálsavból szintetizálják, majd redukciót (például hidrazin/FeOOH-val) és rezorcinollal történő kondenzációt követnek metánszulfonsavban. A nyerstermék 5- és 6-izomerek keveréke, amelyeket kristályosítással választanak el. A modern (mikrohullámú vagy enzimes) módszerek javíthatják a hozamot és csökkenthetik a melléktermékek mennyiségét. A HPLC-vel végzett végső tisztítás ≥95%-os tisztaságot biztosít, szerkezetét NMR és MS igazolja.

Tárolás – A vegyület fényre, levegőre és nedvességre érzékeny. Tárolja lezárt, argonnal átöblített tartályban, 4°C-on, sötétben. Hosszú távú tároláshoz (>6 hónap) -20°C porként javasolt (legalább 3 évig stabil). A DMSO-ban készült oldatok -80 °C-on 6 hónapig vagy -20 °C-on 1 hónapig tárolhatók. Kerülje az ismételt fagyasztási-felengedési ciklusokat. Szállítás környezeti hőmérsékleten elfogadható, ha fénytől és nedvességtől védve van.

Gyakran Ismételt Kérdések (GYIK)

1. kérdés: Mi a különbség az 5-aminofluoreszcein (5-AF) és a FITC között? Hogyan válasszak?

V: Mindkettő zölden fluoreszkáló festék, de reaktív csoportjaik eltérőek.

● Az 5‑AF primer amint (–NH₂) tartalmaz. Ez megköveteli a célpont karboxilcsoportjának aktiválását (EDC/NHS használatával) a konjugáció előtt. A legjobb olyan molekulák címkézésére, amelyek már tartalmaznak karboxilcsoportot.

● A FITC-nek van egy izotiocianát csoportja (–N=C=S), amely közvetlenül reagál a célponton lévő aminokkal (pl. lizin-maradékokkal a fehérjékben) – nincs szükség előzetes aktiválásra. A FITC kényelmesebb a rutin fehérjejelöléshez.

● Válassza az 5‑AF-et, ha speciális, orientált konjugációra van szüksége (például karboxil fogantyún keresztül), vagy ha egyedi fluoreszcens származékok szintetizálását tervezi. A FITC általában egyszerűbb a közvetlen antitestjelöléshez.

2. kérdés: Melyek a tipikus reakciókörülmények a biomolekulák 5‑AF-vel történő jelölésénél?

V: A leggyakoribb módszer az amid kapcsolás: aktiválja a karboxilcsoportokat a célmolekulán EDC-vel és NHS-sel (MES vagy PBS pufferben, pH 5,5-6,5), majd adjon hozzá 5-AF-et és állítsa be a pH-t 7,5-8,5-re. Inkubálja szobahőmérsékleten vagy 37°C-on 2-4 órán keresztül. Aldehidet tartalmazó célpontok (pl. glikoproteinek) esetén használjon reduktív aminálást nátrium-ciano-bór-hidriddel. A fel nem reagált festék sómentesítéssel vagy dialízissel eltávolítható. Az 5:1 és 20:1 közötti festék-fehérje mólarány jó kiindulási pont.

Miért Cosperpharm? – Versenyelőnyeink

Vegye fel velünk a kapcsolatot

Akár kis mintára van szüksége egy kísérleti kísérlethez, akár nagy mennyiségre van szüksége kereskedelmi gyártáshoz, a Cosperpharm készen áll a segítségére. Lépjen kapcsolatba velünk még ma, hogy megbeszéljük az 5-aminofluoreszceinnel kapcsolatos igényeit – és nézzük meg, hogyan segíthetünk projektje előremozdításában.