2'-O-metil-rA(N-Bz)-foszforamidit

A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit egy módosított foszforamidit monomer, amely oligonukleotid szintézishez használható. A 2'-O-metil módosítás jelentős nukleáz rezisztenciát biztosít az oligonukleotidokkal szemben, miközben az RNS/RNS duplexek hidrogénkötési tulajdonságait hűbben megőrzi, mint a DNS/RNS hibridek. RNS-interferencia (RNAi) alkalmazásokban a 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit gyakran beépül a kis interferáló RNS (siRNS) duplexek szensz és antiszensz szálaiba, hogy fokozza a szérum stabilitását és csökkentse a célon kívüli hatásokat az RNSi aktivitás veszélyeztetése nélkül. A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit kritikus építőelemként is szolgál a helyspecifikus 2'-O-metiladenozin módosításokat tartalmazó RNS-oligonukleotidok kémiai szintézisében; a védőcsoportok (DMT az 5′-nél, Bz az N6-nál, CE-foszforamidit a 3′-nél) lehetővé teszik az RNS-szálak lépésenkénti összeállítását nagy pontossággal és ellenőrzéssel automatizált DNS/RNS szintetizátorokon. Az RNS-terápián túl a 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit alkalmazást talált foszfátelágazású RNS-modellek szintézisében, szokatlan RNS-architektúrák tanulmányozásában és termikusan stabilizált fluoreszcens oligonukleotid próbák előállításában.

Termékparaméterek

Miért Cosperpharm? – Versenyelőnyeink

A termék előnyei

1. 2′-O-metil-módosítás a nukleázrezisztencia és a hőstabilitás érdekében

A 2'-O-metil módosítás a ribóz 2'-helyzetében az egyik legszélesebb körben validált kémiai módosítás az oligonukleotid terápiában. A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamiditot tartalmazó oligonukleotidok jelentősen megnövekedett rezisztenciát mutatnak az endo- és exonukleázokkal szemben a módosítatlan RNS-hez képest, az RNS/RNS duplexek hőstabilitása (megnövekedett Tm) pedig a Watson-Crick bázis-specifitás veszélyeztetése nélkül. Ezt a módosítást sikeresen alkalmazták az FDA által jóváhagyott oligonukleotid gyógyszerekben és számos klinikai stádiumú jelöltben.

2. N6-benzoil védelem a nagy pontosságú szintézishez

Az adeninbázis N6 exociklusos aminján lévő benzoil (Bz) védőcsoport megakadályozza a nemkívánatos mellékreakciókat a foszforamidit kapcsolási ciklus során, például a depurináció vagy acilezés által okozott elágazást vagy láncvégződést. A Bz-csoportot standard oligonukleotid-védőcsoport-eltávolítási körülmények között (tömény ammónia, 55 °C, 8-16 óra vagy AMA) tisztán eltávolítjuk, így a natív adenin bázist kapjuk kimutatható melléktermékek nélkül.

3. C3′-Endo Sugar Conformation Előszervezés

A 2'-O-metil szubsztitúció a ribózcukrot egy C3'-endo (északi) konformációba zárja – ugyanazt a konformációt, amelyet az RNS is felvesz az A-formájú duplexekben. Ez a konformációs előszerveződés csökkenti a komplementer RNS-célpontokhoz való hibridizáció utáni entrópiás büntetés mértékét, ami magasabb kötési affinitást (magasabb Tm) eredményez a 2'-O-metil-módosított oligonukleotidokhoz, mint az azonos szekvenciájú DNS-hez vagy módosítatlan RNS-hez képest.

4. Szabványos védőcsoport-kompatibilitás automatizált szintézishez

A 2′-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit ugyanazokat az 5′-O-DMT és N6-Bz védőcsoportokat hordozza, mint a standard RNS foszforamiditekben, valamint egy β-cianoetil (CE) foszforamidit a 3'-helyzetben. Ez a kialakítás biztosítja a zökkenőmentes integrációt a meglévő automatizált DNS/RNS szintetizátor munkafolyamataiba anélkül, hogy speciális védőcsoport-eltávolítási protokollokra vagy módosított csatolási feltételekre lenne szükség.

5. Széles körű terápiás hasznosság az oligonukleotid-platformokon keresztül

A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit többféle oligonukleotid terápiás platformon alkalmazzák: siRNS (szensz és antiszensz szál módosítások), antiszensz oligonukleotidok (ASO-k) a géncsendesítéshez, aptamerek célzott szállításhoz és diagnosztikai alkalmazásokhoz, valamint módosított RNS-próbák molekuláris diagnosztikai alkalmazásokhoz. A 2'-O-metil-módosítást a CRISPR-Cas vezető RNS-ekben is széles körben alkalmazzák a stabilitás és a szerkesztési hatékonyság fokozása érdekében.

Alkalmazási forgatókönyvek

1. siRNS terápiás fejlesztés

A 2′-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit 2′-O-metiladenozin módosítások bevezetésére szolgál kis interferáló RNS (siRNS) duplexek szensz és/vagy antiszensz szálaiba a szérum stabilitásának fokozása, az RNSi gépezet által közvetített off-target hatások csökkentése érdekében (pl.8, LR immunostimulation) aktiválás). A 2'-O-metil-módosítás számos klinikailag fejlett siRNS-platform standard összetevője.

2. Antisense Oligonukleotid (ASO) gyártás

A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit széles körben beépül az antiszensz oligonukleotidokba géncsendesítési alkalmazásokhoz. A 2'-O-metil-módosítás nukleázrezisztenciát biztosít a biológiai folyadékokban lévő ASO-kkal szemben, és fokozza a komplementer RNS-célpontokhoz való kötődési affinitást anélkül, hogy megzavarná az RNáz H által közvetített hasítási mechanizmusokat (ha 2'-O-metil/2'-dezoxi gapmer kialakításban van elhelyezve).

3. RNS-oligonukleotid kémiai szintézis

A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit a helyspecifikus 2'-O-metiladenozin-maradékokat tartalmazó RNS-oligonukleotidok szilárd fázisú kémiai szintézisének építőköveként szolgál. A védőcsoportok (5'-O-DMT, N6-Bz, CE-foszforamidit) kompatibilisek a szabványos RNS szintézis ciklusokkal és védőcsoport-eltávolítási feltételekkel (NH₃, 55°C, 8-16 óra vagy AMA), lehetővé téve a zökkenőmentes integrációt a bevált szintézis munkafolyamataiba.

4. Fluoreszcens oligonukleotid szonda tervezése

A 2'-O-metil-módosítások javítják a valós idejű PCR-ben és in situ hibridizációban használt fluoreszcens próbák (pl. molekuláris jelzőfények, TaqMan próbák) termikus stabilitását. A 2′-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit lehetővé teszi stabilizáló módosítások bevezetését a próbaszekvenciákba, növelve a jel-zaj arányt, és lehetővé teszi az alacsony előfordulású RNS-célpontok robusztusabb kimutatását.

5. Aptamer fejlesztés Kémiailag módosított aptamereket tartalmazó

A 2'-O-metil-nukleotidok jobb nukleáz rezisztenciát, meghosszabbodott in vivo felezési időt és fokozott célkötő affinitást mutatnak a módosítatlan RNS-aptamerekhez képest. A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit a 2'-O-metil-módosított aptamer könyvtárak szilárdfázisú szintézis útján történő létrehozásának kulcsfontosságú építőköve.

6. CRISPR-Cas útmutató RNS (gRNS) módosítása

A CRISPR-Cas gRNS-ekben meghatározott pozíciókban elhelyezett 2'-O-metil módosítások fokozhatják a stabilitást, csökkenthetik az immunogenitást és javíthatják a szerkesztési hatékonyságot a sejtekben és in vivo. A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit lehetővé teszi a 2'-O-metiladenozin-maradékok helyspecifikus bejuttatását kémiailag szintetizált gRNS-ekbe.

7. Foszfát-elágazó RNS-kutatás

A szokatlan RNS-architektúrákat, például a foszfát-elágazású RNS-t tanulmányozó kutatók 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamiditet használnak egyetlen szabad 2'-OH-csoportot tartalmazó modell-oligonukleotidok előállítására az elágazó láncú foszfotriészter kötések között fennálló hidrolitikus stabilitás vizsgálatára.

8. Módosított oligonukleotidok termikus stabilitási vizsgálatai

A 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit a módosított oligonukleotid duplexek termikus stabilitásának (Tm) szisztematikus tanulmányozásában használatos, beleértve a 2'-O-metil-módosítások helyzeti hatásainak jellemzését a duplex olvadási hőmérsékletére és a hibridizációs termodinamikára.

9. Szilárd fázisú oligonukleotid szintézis

Folyamatfejlesztés A folyamatvegyészek és az oligonukleotid szintézissel foglalkozó szakemberek a 2'-O-metil-rA(N-Bz) foszforamiditet használják a kapcsolási feltételek, a védőcsoport-eltávolítási protokollok és a tisztítási módszerek optimalizálására a 2'-O-metil-módosított nukleinsav terápiás szerek nagyléptékű gyártásához. A Cosperpharm köteg-specifikus analitikai adatokat biztosít a folyamatérvényesítés és a bővítési tevékenységek támogatásához.

10. Analitikai módszerfejlesztés az oligonukleotidok minőségellenőrzésére

A 2′-O-metil-rA(N-Bz) foszforamidit referencia standardként használatos a HPLC és LC-MS módszerek kifejlesztésében az oligonukleotid hatóanyagok és gyógyszertermékek módosított nukleozidtartalmának mennyiségi meghatározására, valamint a szintézissel összefüggő szennyeződések (pl. oxidációs melléktermékek eltávolítása, DMT definíciója) azonosítására.

Lépjen kapcsolatba velünk

Megbízható, nagy tisztaságú 2′-O-metil-rA(N-Bz) foszforamiditre van szüksége a következő oligonukleotid szintézis projektjéhez? A Cosperpharm csapata készen áll a termékspecifikációk, a dokumentációs igények és az Ön alkalmazására szabott ellátási lánc megoldások nyújtására.